Insulin

by

I. TUJUAN

  1. Mengetahui secara lebih baik peran insulin dalam tubuh dan pengaruhnya pada penyakit diabetes
  2. Mengenal teknik untuk mengevaluasi penyakit diabetes dengan cara konvensional dan komputerisasi

 

II. PRINSIP

Penginduksian glukosa pada mencit menyebabkan kenaikan kadar gulah darah mencit yang kadarnya dapat diturunkan dengan pemberian obat antidiabetes

 

IV. ALAT DAN BAHAN

  1. a.  Percobaan Uji Diabetes Secara Konvensional (Wet Lab)

Hewan Percobaan  :

  1. Mencit putih

 

Alat Percobaan       :

  1. Glukometer
  2. Glucose test strips
    1. Sonde Oral
    2. Timbangan

Bahan percobaan    :

  1. Glibenklamid
    1. Glukosa
    2. PGA 2%

b. Percobaan Uji Diabetes Menggunakan Komputerisasi (Dry Lab)

    Alat Percobaan        :

  1. Komputer
  2. Software untuk uji diabetes

 

 

  1. c.  Gambar alat

 

 

 

                                                                Komputer

 

 

                              Glukometer

                            Sonde oral

 

 

 

 

 

                  Glucose test strips

 

                  Timbangan

V. PROSEDUR

  1. A.           Percobaan Uji Diabetes Secara Konvensional (Wet Lab)

Pada percobaan ini dilakukan pengukuran glukosa darah menggunakan glucose meter dan glucose test scripts. Bagian ujung ekor mencit dipotong, kemudian darah diteteskan ke bagian ujung strips dan setelah 20 detik kadar glukosa darah akan terlihat pada monitor glucosemeter. Sebelum percobaan hewan dipuasakan, tidak diberi makan teteapi tetap diberikan minum. Mencit ditimbang, dan diamati sebelum pemberian obat. Mencit dikelompokkan menjadi 2 kelompok :

a. Kelompok control negative

c. Kelompok uji

Kelompok control negative diberikan PGA 2%, kelompok uji diberikan Gliben-klamid. Sebelum pemberian glukosa dilakukan pengambilan darah pada semua mencit (t=0). Kemudian semua mencit diberikan glukosa setelah t=30 menit.Dilakukan pengambilan darah pada semua mencit pada menit 15,30, 60 setelah diberikan glukosa. Pengukuran glukosa darah dilakukan menggunakan glucose meter dan glucose test strips. Bagian ujung ekor mencit dipotong, kemudian darah diteteskan ke bagian ujung strip dan setelah 20 detik kadar glukosa darah akan terlihat pada monitor glucose meter. Data yang diperoleh diananlisis secara statistik berdasarkan analisis variansi dan kebermakna perbedaan kadar glukosa antara kelompok control negative, dan kelompok uji kemudian dianalisis dengan student’s test. Data disajikan dalam bentuk tabel atau grafik.

  1. B.            Percobaan Uji Diabetes Menggunakan Komputerisasi (Dry Lab)

Percobaan I : Pembuatan Kurva Standard dan Glukosa

Tube 1-5 disiapkan, dengan cara diklik dan didrag tabung kedalam slot incubator sesuai nomor yang telah disediakan. Diklik dan ditahan mouse pada pipet tetes botol Glucose Standard, kemudian didrag dan diteteskan pada tabung no.1 denga melepaskan tombol mouse. Langkah tadi diulangi untuk tabung no.2-5. Tiap tabung otomatis akan mendapat larutan standar glukosa satu tetes lebih banyak (Tabung no.2 mendapat 2 tetes, no.3 mendapat 3 tetes, no.4 mendapat 4 tetes, dan no.5 mendapat 5 tetes). Diklik dan ditahan mouse pada pipet tetes botol Deionized Water, kemudian didrag dan diteteskan pada tabung no.1 dengan melepaskan tombol mouse, otomatis akan memberikan 4 tetes pada tabung no 1. Langkah tadi diulangi untuk tabung no.2-4. Tiap tabung otomatis akan mendapat larutan standar glukosa satu tetes lebih sedikit (tabung no.2 mendapat 3 tetes, no.3 mendapat 2 tetes, no. 4 mendapat 1 tetes). Tombol Mix diklik pada incubator yang mencampur bahan dalam tabung. Diklik tombol Centrifuge, maka tabung akan turun kedalam incubator dan disentrifugasi sehingga partikel yang mengendap di bagian bawah tabung yang disebut ‘pellet’. Diklik tombol Remove Pellet untuk menghilangkan endapan yang terbentuk . Diklik dan tahan mouse pada pipet tetes botol Enzyme-Colour Reagent, kemudian drag dan teteskan pada tabung no.1 dengan melepaskan tombol mouse, otomatis akan memberikan 5 tetes. Diulangi langkah tadi untuk tabung no.2-5. Diklik tombol incubate, tabung akan masuk kedalam incubator untuk diinkubasi. Tombol Set Up diklik pada spektrofotometer yang memanaskan alat dan mengkalibrasinya sehingga siap digunakan dalam pengukuran. Klik dan drag tabung no.1 ke dalam spektrofotometer kemudian lepaskan tombol mouse, tabung akan terkunci pada tempatnya. Diklik tombol Analyze, akan terlihat pada layer nilai Optical Density dan Glucose. Diklik tombol Record Data. Diklik dan Didrag kedalam pencuci tabung. Ulangi langkah 13-16 untuk tabung yang lainnya. Setelah semua tabung dianalisis, klik tombol Graph sehingga terbentuk kurva yang dapat digunakan pada percobaan tahap II.

Percobaan II : Membandingkan kadar glukosa sebelum dan sesudah injeksi insulin

Alat suntik Saline pada tikus control diklik dan didrag kemudian dilepaskan tombol untuk menginjeksi hewan tersebut. Diklik dan Didrag alat suntik Alloxan pada tikus percobaan dan lepaskan tombol mouse untuk menginjeksi hewan tersebut. Diklik dan Didrag tabung baru pada tikus control dan lepaskan tombol, sehingga 3 tetes darah dari ekor tikus akan masuk ke dalam tabung, kemudian diklik dan didrag tabung ke tempat no.1 pada inkubator. Diklik dan didrag tabung baru pada ekor tikus percobaan dan dilepaskan tombol, sehingga 3 tetes darah dari ekor akan masuk ke dalam tabung, kemudian diklik dan didrag tabung ke tempat no.2 pada incubator. Diklik dan didrag alat suntik Insulin pada tikus control dan dilepaskan tombol mouse untuk menginjeksi hewan tersebut. Diulangi langkah tersebut untuk hewan percobaan. Diulangi langkah ke 3 dan 4 untuk memperoleh sample darah dari tiap tikus dan disimpan ditempat no.3 dan 4 pada incubator. Diklik tombol Obtainreagent pada cabinet sehingga alat sunti dan tikus akan hilang dan muncul 3 botol tetes pada layar. Diklik dan tahan mouse pada pipet tetes botol Deionized Water, kemudian didrag dan diteteskan pada tabung no.1 dengan melepaskan tombol mouse, otomatis akan memberikan 5 tetes pada tabung no.1. Diulangi langkah tadi untuk tabung yang lainnya. Diklik dan ditahan mouse pada pipet tetes tombol Barium Hydroxide (untuk menghilangkan protein) kemudian didrag dan diteteskan pada tabung no.1 dengan melepaskan tombol mouse, otomatis akan memberikan 5 tetes pada tabung no.1. Diulangi langkah tadi untuk tabung yang lainnya. Diklik dan Ditahan mouse pada pipet tetes botol Heprin (sebagai antikoagulan sehingga darah tidak menggumpal selama pengujian) kemudian didrag dan diteteskan pada tabung no.1 dengan melepaskan tombol mouse. Diulangi langkah tadi untuk tabung yang lainnya . Diklik tombol Mix pada incubator untuk mencampur bahan dalam tabung. Diklik tombol Centrifuge, maka tabung akan turun ke dalam incubator dan disentrifugasi. Diklik tombol Remove Pellet untuk menghilangkan endapan yang terbentu. Diklik dan ditahan mouse pada pipet tetes botol Enzyme-Colour Reagent, kemudian didrag dan diteteskan pada tabung no.1 dengan melepaskan tombol mouse. Diulangi langkah tadi untuk tabung yang lainnya. Diklik tombol Incubate, tabung akan masuk ke dalam incubator untuk inkubasi. Diklik tombol Set Up pada spektrofotometer untuk memanaskan alat dan mengkalibrasinya sehingga siap digunakan pada pengukuran. Diklik tombol Graph Glucose Standard untuk memunculkan grafik dari percobaan 1. Diklik dan drag tabung no.1 ke dalam spektrofotometer kemudian lepaskan tombol mouse, tabung akan terkunci pada tempatnya. Diklik tombol Analyze, akan terlihat pada layar garis horizontal dan nilai Optical Density. Drag moveable rule (garis vertical merah pada bagian kanan monitor spektrofotometer) melewati garis horizontal melewati garis glukosa standar. Lihatlah apa yang terjadi pada layar glukosa ketika memindahkan garis tersebut ke kiriBacalah kadar glukosa ketika garis horizontal melewati garis standar glukosa

Tabung test no.1 :   86 mg/desiliter glukosa

Klik tombol Record Data. Klik dan drag tabung dari spektrofotometer ke dalam pencuci tabung, kemudian klik Clear. Ulangi langkah 22-27 untuk tabung yang lainnya dan catatlah kadar glukosanya

Tabung test no.2 :  129  mg/desiliter glukosa

Tabung test no.3 :    86  mg/desiliter glukosa

Tabung test no.4 :    97  mg/desiliter glukosa

Silahkan tinggalkan pesan dan saran yang hendak Anda kirimkan ^_^